一、细胞培养条件

细胞名称：人骨肉瘤细胞MG63

生长特性：贴壁生长

冻存条件：无血清冻存液

培养体系：MEM + 10% FBS + 1% P

传代方法：第一次建议1:2传代

备注：在传代后2天需更换培养基。请使用无菌离心管收集培养基，以便进行过渡对比培养。如对比效果不佳，建议直接选择尊龙凯时的完全培养基。

二、细胞处理及培养

收到细胞后，请及时培养至良好状态并填满完全培养液，然后封好瓶口，这是运输细胞的最佳方法。收到细胞后，请用75%酒精喷洒整个细胞瓶进行消毒，之后放入超净台内进行无菌操作。将细胞瓶放入37℃、5% CO2的培养箱中静置3-4小时，使细胞状态稳定后再进行处理。使用显微镜观察细胞生长情况，并拍摄不同倍数的照片以便保存（建议40x, 100x, 200x各一张）。前三天的照片是重要的售后依据，未提供照片默认收到状态良好。此外，传代后建议将一瓶用原瓶的完全培养基，另一瓶使用自制完全培养基，以便进行对比培养，换液后请拧松瓶盖。

三、细胞培养步骤

a. 细胞传代

如果细胞未超过80%汇合度，将瓶内的完全培养液收集至离心管中，保留5ml完全培养基，放入37℃、5% CO2孵箱培养；若细胞密度超过80%，即可进行传代，具体步骤如下：

弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS洗涤细胞1-2次。
加入0.25%胰蛋白酶消化液约1-2ml至培养瓶中，置于37℃培养箱中消化1-2分钟后在显微镜下观察细胞状态；如大部分细胞已变圆并脱落，迅速返回操作台，轻敲培养瓶后加入5ml以上完全培养基终止消化。
轻轻吹打细胞使其完全脱落后吸出，将悬液转移至15ml离心管中，1000RPM离心5分钟，弃去上清液，补加1-2ml完全培养基重悬。
按1:2的比例进行分瓶传代（两个T25瓶），补充新的完全培养基至5-8ml/瓶，最后放入37℃、5% CO2的细胞培养箱内继续培养。

b. 细胞冻存

当细胞生长至覆盖T25培养瓶的80%时，弃去培养液，用PBS清洗细胞一次。
添加0.25%胰蛋白酶消化液约1ml至培养瓶中，置于显微镜下观察，待细胞回缩变圆时，加入5ml完全培养液终止消化，再轻轻吹打使细胞脱落，将悬液转移至15ml离心管，1000RPM离心5分钟。
弃上清液，加入1ml尊龙凯时无血清冻存液（货号：C7001），混匀后转入冻存管中。
冻存细胞应直接放入-80℃冰箱中，如后期需转移至液氮罐，应在-80℃冰箱中存放24小时以上后再转入液氮罐。

c. 细胞复苏

从液氮中取出细胞冻存管（请佩戴防护面具），迅速置于37℃水浴中解冻，直至无结晶，然后用75%的酒精擦拭冻存管外壁。
将冻存管中的细胞移至含5ml完全培养基的15ml离心管中，1000RPM离心5分钟。
弃去上清，沉淀后用5ml完全培养基重悬，接种至T25培养瓶，放于37℃、5% CO2细胞培养箱中培养。
第二天更换为新鲜的完全培养基继续培养。

四、注意事项

部分细胞由于粘附性较弱，运输过程中可能发生脱落，这是正常现象。如脱落细胞较多，请将培养瓶内所有培养液收集至离心管，1000RPM离心5分钟，然后收集上清液进行过渡培养。对于沉淀细胞，加入1-2ml胰酶进行轻轻吹打，然后消化1-2分钟，添加5ml完全培养基终止反应，再离心，弃去上清液后补加1-2ml完全培养基重悬，最后按1:2比例进行分瓶传代（两个T25瓶），补充新的完全培养基至5-8ml/瓶，放入37℃、5% CO2培养箱中培养。

五、售后条款

1）细胞出现问题时重发的情况： (1) 在运输过程中遇到的细胞丢失、瓶身破损、培养液漏漏等问题，将予以重发； (2) 若收到的细胞出现污染问题，需在48小时内提供真实的实验结果，经核实后将重发； (3) 常温发货的细胞在静置24小时后，或者干冰快递的细胞复苏后24小时仍未存活（需提供清晰的细胞状态照片），应予重发； (4) 若干冰快递的细胞复苏后24小时且未开封的情况下发生污染，亦将进行重发； (5) 对于细胞活性问题，请于收到产品7天内提供真实实验结果，使用台盼蓝染色法鉴定细胞活力，核实后将重发； (6) 细胞收到当天及第2、3天须拍照，如3天内未告知，将视为产品合格。对于第4至第7天尸体出现问题的，需提供前3天照片及与技术人员沟通的相关信息，由技术人员判断责任。责任方可协商处理或按合同价的50%收费重发。

2）细胞出现问题不予重发的情况：（1）客户因个人原因造成的细胞污染不重发；（2）因客户操作不当导致的细胞状态不良不重发；（3）因非尊龙凯时推荐的细胞培养体系导致的细胞状态不佳不重发；（4）细胞状态不良但未提供前3天的照片不重发；（5）细胞培养过程中其他干预处理的不重发；（6）2天内收到的细胞未及时告知的问题不重发；（7）其它视情况处理。